科研必看 | 从“WB翻车”到“条带封神”，这7个高分期刊通关秘籍请收好！

导读

在科研圈，Western blot（WB）堪称“实验玄学”——条带忽明忽暗、背景脏如马赛克、分子量对不上……好不容易做出结果，却因图片不合格被期刊拒稿？别慌！今天手把手教你从“WB新手”变“条带达人”，轻松拿捏符合期刊要求的“神仙条带图”！  

一、实验设计：避坑第一步

☑ 你真的懂“对照”吗？

- 阳性对照（证明体系可行）、阴性对照（排除非特异性结合）、内参对照（校正上样量）缺一不可！  

- 举例：研究肿瘤蛋白表达，记得同时测癌组织（阳性）、正常组织（阴性）、β-actin内参。  

**划重点**：没有对照的WB=“自说自话”，期刊编辑秒拒没商量！ 

二、样本制备：细节控的自我修养

☑ 蛋白提取3大雷区，千万别踩！

① 暴力提取=蛋白碎一地

超声/研磨时控制强度，避免蛋白降解（尤其脆性样本）。

② 浓度测定摆烂=条带忽胖忽瘦

用BCA/Bradford法精确测浓度，上样量误差≤5%！

③ Loading Buffer没煮透=高分子量“拖尾”

95℃煮样5-10分钟，离心后取上清，别偷懒！  

三、电泳与转膜：承上启下的“技术活”

☑ 电泳：选对胶，条带分分钟“站队”

- 小分子蛋白（<20kD）：12%-15% SDS-PAGE胶，跑快一点（电压≥80V，避免扩散）。  

- 大分子蛋白（>100kD）：8%-10%胶，低电压慢跑，防止“卡胶”。 

☑  转膜：膜选不对，前功尽弃！

- PVDF膜：疏水强，适合>20kD蛋白，用甲醇活化30秒。  

- NC膜：亲水好，适合<20kD蛋白，但易脆易漏。 

四、抗体孵育：抗体选对，条带自带“高光”

☑ 抗体避坑指南

- 一抗：认准“验证过的应用”（比如明确标注“WB适用”，别买“科研盲盒”）。  

- 二抗：种属匹配是底线（小鼠一抗配抗小鼠二抗，HRP/AP标记按需选）。  

五、显色成像：捕捉条带的“决定性瞬间”

① 成像设备

选择拍照速度快，信噪比高的设备。

② 曝光策略

先短后长（避免过曝，保留背景灰度值≤25%）。

六、图片处理：美化≠造假，这3步可做！

☑ 允许的操作：

- 裁剪白边（突出条带区域）  

- 统一亮度/对比度（全局调整，禁止局部P图！）  

- 标注分子量Marker（用箭头/数字清晰标出）  

✖ 绝对禁止：

- 复制粘贴条带（期刊查重系统能扫出来！）  

- 抹除背景杂点（真实数据比“完美”更重要）

七、期刊要求：投稿前的“最后安检”

☑ 必查清单：

- 分辨率：300dpi及以上（tiff格式优先）  

- 条带顺序：与实验描述完全一致（从左到右标清样本编号）  

- 图注规范：包含抗体名称、稀释度、内参信息（例：β-actin, 1:1000） 

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